western blotting

定義：總蛋白進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至尼龍膜，用特定蛋白質(zhì)抗體進行免疫反應，顯色后可顯示該特定蛋白的存在與表達量。用來檢測在不均一的蛋白質(zhì)樣品中是否存在目標蛋白的一種方法。

學科：細胞生物學_細胞生物學技術(shù)

相關(guān)名詞：聚丙烯酰胺凝膠電泳 免疫反應 抗原抗體復合物

圖片來源：視覺中國

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蛋白質(zhì)印跡法也稱免疫印跡法，是一種常用的蛋白質(zhì)檢測方法，它通過電泳將目標蛋白從復雜的樣品中分離出來，然后將特異性抗體與待測蛋白結(jié)合，最后利用免疫染色技術(shù)將目標蛋白可視化地顯示在固相載體上并進行定量分析。

蛋白質(zhì)印跡法通常包括以下步驟：

1.提取總蛋白質(zhì)：首先需要從組織、細胞或體液等生物樣本中提取總蛋白質(zhì)。在這個過程中需要注意避免蛋白質(zhì)的降解和失活。

2.分離蛋白質(zhì)：將提取的蛋白質(zhì)進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳后不同相對分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)被分離。不同的蛋白質(zhì)需要不同的電泳條件（電壓、電流、時間等參數(shù)）才能得到最佳分離效果。

3.轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)：將分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或其他固相載體上，使蛋白質(zhì)表面化，以便與特異性抗體相結(jié)合。需要控制電轉(zhuǎn)移時間和轉(zhuǎn)移緩沖液的濃度等，以確保蛋白質(zhì)能夠被充分轉(zhuǎn)移并保持活性。

4.免疫反應：目標蛋白作為抗原與相應的第一抗體特異性結(jié)合，酶或同位素標記的第二抗體再與第一抗體特異性結(jié)合，形成抗原抗體復合物。

5.檢測：使用適當?shù)臉擞浳铮ㄈ鐭晒馊玖?、化學發(fā)光劑等）對抗原抗體復合物進行檢測，從而確定目標蛋白的存在及相對濃度。

6.結(jié)果分析：對免疫印跡法的結(jié)果進行定量分析和比較，以確定目標蛋白的相對濃度及表達情況。進行結(jié)果分析時需要注意結(jié)果的可靠性和重復性。

蛋白質(zhì)印跡法具有靈敏度高、特異性高和可定量等優(yōu)點，被廣泛應用于生物醫(yī)學研究、藥物開發(fā)和臨床診斷等領(lǐng)域。

（延伸閱讀作者：西華師范大學生態(tài)研究院 楊煒蓉博士）

責任編輯：張鵬輝